禽呼腸孤抗體檢測試劑盒
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用來檢測雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體
- 產(chǎn)品描述
用來檢測雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體
【試驗原理】
禽呼腸孤病毒被認為與病毒性關節(jié)炎、發(fā)育遲緩綜合征、呼吸系統(tǒng)疾病、腸熱病、吸收障礙綜合癥和骨質(zhì)疏松有關，從未發(fā)病的雞中也可分離到呼腸孤病毒，根據(jù)宿主日齡、毒力和接觸病毒途徑的不同，病毒誘發(fā)疾病的的性質(zhì)、癥狀和嚴重程度也不同，雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體水平及整個雞群的免疫狀況可用ELISA方法進行監(jiān)測。
將滅活的抗原包被在微孔板上，加入稀釋后的血清并孵育。血清中的所有抗REO抗體將與微孔板上的REO抗原結(jié)合并形成REO抗原-抗體復合物，然后洗掉未結(jié)合的物質(zhì)，加入堿性磷酸酶標記的抗雞的IgG（結(jié)合物）至微孔板中，結(jié)合物將與REO抗原-抗體復合物結(jié)合，孵育后洗掉未結(jié)合的結(jié)合物，加入底物溶液。底物與堿性磷酸酶發(fā)生反應形成黃色的物質(zhì)。zui后，終止反應，將顏色固定。顏色的深淺可用酶標儀（405-410nm）測定。
【一個微孔板所需的試劑的量】
| 抗原包被微孔板 | 12×8條（板） |
| 樣品稀釋液（1×） | 120ml |
| 洗滌液（1×） | 500ml |
| 陽性對照 | 2μl |
| 陰性對照 | 2μl |
| 結(jié)合物 | 12ml |
| 底物液 | 12ml |
| 終止液 | 12ml |
【所需物品】
1. 能夠吸取2μl、100μl和800μl的精確移液器
2. zui大吸取100μl的多通道移液器
3. 計時器
4. 量筒
5. 蒸餾水
6. 洗板機
7. 稀釋用容器
8. 能夠讀雙波（405-410nm和630-650nm）的酶標儀，OD值讀數(shù)zui大可達到3.0
【樣品收集】
采集至少0.5ml全血，分離血清并放在冰箱里，2-7℃用于短期儲存，如果長期儲存，應冷凍，且避免反復凍溶。如果樣品含有可見的顆粒物質(zhì)，應在檢測之前將其離心除去，嚴重污染的樣品不允許使用（如高度渾濁、細菌污染等）
【結(jié)果計算】
將陽性對照吸光度值和樣品吸光度值分別減去陰性對照吸光度值，注意：對照品及樣品吸光度值都應該是2個重復孔的平均值。每個樣品的計算式如下：
| 樣品平均吸光度值－陰性對照吸平均吸光度值 | ＝樣品與陽性對照比值（Sp） |
| 陽性對照平均吸光度值－陰性對照平均吸光度值 |
Sp ×（100）＝ ELISA Unit （EU） 陽性對照值設為100 EU
【結(jié)果判定及EU單位說明】
REO ELISA 值 說明
小于10EUs REO抗體為陰性
10-25 EUs REO抗體為弱陽性，應被認為經(jīng)過免疫或暴露于REO，油乳狀疫苗也可能引起非特異性低水平抗體。
25-75 EUs REO抗體適度陽性
＞75 EUs REO抗體強陽性
【操作步驟】
1. 將試劑回溫至室溫，通過顛倒和渦旋將試劑混勻。
2. 將1份4×樣品稀釋液加入到含3份去離子水的容器中，充分混勻，例如，30ml 4×樣品稀釋液加入到90ml去離子水中。
3. 將1份20×洗滌液加入到含19份去離子水的容器中，充分混勻，例如，25ml 20×洗滌液加入到475ml去離子水中。
4. 稀釋前將陽性對照、陰性對照和樣品震蕩均勻。
5. 陽性對照、陰性對照和樣品均需要用樣品稀釋液稀釋后使用。稀釋比例為2μl ：800μl。將移液器調(diào)到100μl，反復吹打4次使之充分混勻。
6. 將稀釋后的陰性對照、陽性對照分別加入微孔中，每種做兩個平行，每孔100μl；將稀釋后的樣品100μl分別加入孔中，室溫下靜置30分鐘。
7. 棄去微孔板中溶液，每孔加入300μl洗滌液洗滌，重復洗滌2次，在洗滌過程中防止酶標板變干。
8. 每孔立即加入100μl結(jié)合物，室溫靜置30分鐘。
9. 重復步驟7進行洗板。
10. 每孔立即加入100μl底物，室溫靜置30分鐘。
11. 不要倒掉板內(nèi)液體，每孔立即加入100μl終止液。
12. 用酶標儀雙波讀數(shù)（405nm或410nm作為主要波長，630nm或650nm為參考波長），計算結(jié)果。
【結(jié)果判定及EU單位說明】
REO ELISA 值 說明
小于10EUs REO抗體為陰性
10-25 EUs REO抗體為弱陽性，應被認為經(jīng)過免疫或暴露于REO，油乳狀疫苗也可能引起非特異性低水平抗體。
25-75 EUs REO抗體適度陽性
＞75 EUs REO抗體強陽性
【操作步驟】
1. 將試劑回溫至室溫，通過顛倒和渦旋將試劑混勻。
2. 將1份4×樣品稀釋液加入到含3份去離子水的容器中，充分混勻，例如，30ml 4×樣品稀釋液加入到90ml去離子水中。
3. 將1份20×洗滌液加入到含19份去離子水的容器中，充分混勻，例如，25ml 20×洗滌液加入到475ml去離子水中。
4. 稀釋前將陽性對照、陰性對照和樣品震蕩均勻。
5. 陽性對照、陰性對照和樣品均需要用樣品稀釋液稀釋后使用。稀釋比例為2μl ：800μl。將移液器調(diào)到100μl，反復吹打4次使之充分混勻。
6. 將稀釋后的陰性對照、陽性對照分別加入微孔中，每種做兩個平行，每孔100μl；將稀釋后的樣品100μl分別加入孔中，室溫下靜置30分鐘。
7. 棄去微孔板中溶液，每孔加入300μl洗滌液洗滌，重復洗滌2次，在洗滌過程中防止酶標板變干。
8. 每孔立即加入100μl結(jié)合物，室溫靜置30分鐘。
9. 重復步驟7進行洗板。
10. 每孔立即加入100μl底物，室溫靜置30分鐘。
11. 不要倒掉板內(nèi)液體，每孔立即加入100μl終止液。
12. 用酶標儀雙波讀數(shù)（405nm或410nm作為主要波長，630nm或650nm為參考波長），計算結(jié)果。
【公司名稱】廣州健侖生物科技有限公司
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【公司】 www.jianlun.com
【公司地址】廣州市天河區(qū)車陂第十五工業(yè)園一幢4067室
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