　　尼古丁檢測試劑采用競爭抑制法和膠體金免疫層析法原理定性檢測尿液中的尼古丁，以金標(biāo)尼古丁單克隆抗體作為指示標(biāo)記物，在硝酸纖維素膜上的檢測線處和控制線處分別包被尼古丁-BSA結(jié)合物和羊抗鼠IgG多克隆抗體。檢測時，尿樣在毛細效應(yīng)下層析。如尿樣中的尼古丁濃度低于200ng/mL時，金標(biāo)抗體不能全部與尼古丁結(jié)合，未結(jié)合的金標(biāo)抗體在層析過程中與固定在檢測線處的尼古丁-BSA結(jié)合物結(jié)合，從而在檢測區(qū)（T）出現(xiàn)一條紫紅色條帶；如尿樣中尼古丁濃度高于200ng/mL時，金標(biāo)抗體全部與尼古丁結(jié)合，從而在檢測區(qū)（T）因為競爭反應(yīng)不會與尼古丁-BSA結(jié)合物結(jié)合而不出現(xiàn)紫紅色條帶。無論尿樣中是否存在尼古丁，控制區(qū)（C）都會出現(xiàn)一條紫紅色條帶。控制區(qū)（C）所呈現(xiàn)的紫紅色條帶是判斷是否有足夠的尿樣，層析過程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時也作為試劑的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。尼古丁檢測試劑的17個相關(guān)操作技巧如下：

　　1.切記在加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。

　　2.合理安排檢測量，以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。

　　3.在吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

　　4.務(wù)必做雙孔實驗，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度。

　　5.樣品稀釋液應(yīng)用加液器加注，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性。

　　6.為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。

　　7.未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液。

　　8.ELISA試劑盒實驗中，加樣后及時放人孵箱，標(biāo)本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗干凈。

　　9.剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

　　10.人ELISA試劑盒洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

　　11.每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。

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